辽宁福彩网

鑫海耐磨渣浆泵,尊享最优品质!

辽宁福彩网 > 渣浆泵产品知识

>各种显微镜的镜检方法

  • 发布时间:2015-09-18 11:13:03  
  • 一、正立式显微镜

    (一)明视野观察(Bright field)

    明视野镜检是大家比较熟悉的一种镜检方式,广泛应用于病理、检验,用于观察被染色的切片,所有显微镜均能完成此功能。在此不再赘述。

    (二)暗视野观察(Dark field)

    暗视野实际是暗场照明发。它的特点和明视野不同,不直接观察到照明的光线,而观察到的是被检物体反射或衍射的光线。因此,视场成为黑暗的背景,而被检物体则呈现明亮的象。

    暗视野的原理是根据光学上的丁道尔现象,微尘在强光直射通过的情况下,人眼不能观察,这是因为强光绕射造成的。若把光线斜射它,由于光的反射,微粒似乎增大了体积,为人眼可见。

    暗视野观察所需要的特殊附件是暗视野聚光镜。它的特点是不让光束由下至上的通过被检物体,而是将光线改变途径,使其斜射向被检物体,使照明光线不直接进入物镜,利用被检物体表面反射或衍射光形成的明亮图象。

    暗视野观察的分辨率远高于明视野观察,最高达0。02-0。004mm。

    (三)相衬镜检法(Phase contrast)

    在光学显微镜的发展过程中,相衬镜检术的发明成功,是近代显微镜技术中的重要成就。我们知道,人眼只能区分光波的波长(颜色)和振幅(亮度),对于无色通明的生物标本,当光线通过时,波长和振幅变化不大,在明场观察时很难观察到标本.

    相衬显微镜利用被检物体的光程之差进行镜检,也就是有效地利用光的干涉现象,将人眼不可分辨的相位差变为可分辨的振幅差,即使是无色透明的物质也可成为清晰可见。这大大便利了活体细胞的观察,因此相衬镜检法广泛应用于倒置显微镜。

    相衬镜检法在装置上与明场不同,有一些特殊要求:

    1. 环状光阑(Ring slit):装在聚光镜的下方,而与聚光镜组合为一体---相衬聚光镜。它是由大小不同的环形光阑装在一圆盘内,外面标有10X、20X、40X、100X等字样,与相对应倍数的物镜配合使用。

    2. 相板(Phase plate):装在物镜的后焦平面处,它分为两部分,一是通过直射光的部分,为半透明的环状,叫共轭面;另一是通过衍射光的部分,叫“补偿面”。有相板的物镜称“相衬物镜”,外壳上常有“Ph”字样。

    相衬镜检法是一种比较复杂的镜检方法,想要得到好的观察效果,显微镜的调试非常重要。除此之外还应注意以下几个方面。

    1. 光源要强,全部开启孔径光阑;

    2. 使用滤色片,使光波近于单色;

    (四)微分干涉称镜检术(Differential interference contrast DIC)

    微分干涉镜检术出现于60年代,它不仅能观察无色透明的物体,而且图象呈现出浮雕壮的立体感,并具有相衬镜检术所不能达到的某些优点,观察效果更为逼真。

    1. 原理

    微分干涉称镜检术是利用特制的渥拉斯顿棱镜来分解光束。分裂出来的光束的振动方向相互垂直且强度相等,光束分别在距离很近的两点上通过被检物体,在相位上略有差别。由于两光束的裂距极小,而不出现重影现象,使图象呈现出立体的三维感觉。

    2. 微分干涉称镜检术所需的特殊部件:

    (1) 起偏镜

    (2) 检偏镜

    (3) 渥拉斯顿棱镜2 块

    3. 微分干涉称镜检时的注意事项

    (1)因微分干涉衬灵敏度高,制片表面不能有污物和灰尘。

    (2)具有双折射性的物质,不能达到微分干涉衬镜检镜检的效果。

    (3)倒置显微镜应用微分干涉衬时,不能用塑料培养皿。

    (五)荧光镜检术

    辽宁福彩网荧光镜检术是用短波长的光线照射用荧光素染色过的被检物体,使之受激发后而产生长波长的荧光,然后观察。荧光镜检术广泛应用于生物,医学等领域。 1.荧光镜检术一般分为透射和落射式两种类型。

    (1)透射式:激发光来自被检物体的下方,聚光镜为暗视野聚光镜,使激发光不进入物镜,而使荧光进入物镜。它在低倍情况下明亮,而高倍则暗,在油浸和调中时,较难操作,尤以低倍的照明范围难于确定,但能得到很暗的视野背景。透射式不使用于非透明的被检物体。

    (2)落射式:透射式目前几乎被淘汰,新型的荧光显微镜多为落射式,光源来自被检物体的上方,在光路中具有分光镜,所以对透明和不透明的被检物体都适用。由于物镜起了聚光镜的作用,不仅便于操作,而且从低倍到高倍,可以实现整个视场的均匀照明。

    2.荧光镜检术的注意事项

    (1) 激发光长时间的照射,会发生荧光的衰减和淬灭现象,因此尽可能缩短观察时间,暂时不观察时,应用挡板遮盖激发光。

    (2)作油镜观察时,应用“无荧光油”。

    (3)荧光几乎都较弱,应在较暗的室内进行。

    (4)电源最好装稳压器,否则电压不稳不仅会降低汞灯的寿命,也会影响镜检的效果。

    目前许多新兴生物研究领域应用到荧光显微镜,如基因原位杂交(FISH)等等。

    二、偏光显微镜(Polarizing microscope )

    (一)偏光显微镜的特点

    偏光显微镜是鉴定物质细微结构光学性质的一种显微镜。凡具有双折射的物质,在偏光显微镜下就能分辨的清楚,当然这些物质也可用染色法来进行观察,但有些则不可能,而必须利用偏光显微镜。

    偏光显微镜的特点,就是将普通改变为偏光进行镜检的方法,以鉴别某一物质是单折射(各向同行)或双折射性(各向异性)。

    双折射性是晶体的基本特性。因此,偏光显微镜被广泛地应用在矿物,化学等领域。在生物学和植物学也有应用。

    (二)偏光显微镜的基本原理

    偏光显微镜的原理比较复杂,在此不作过多介绍,偏光显微镜必须具备以下附件(a)起偏镜 (b)检偏镜 (c)专用无应力物镜 (d)旋转载物台。

    (三)偏光镜检术的方式

    1、正相镜检(Orthscope):又称无畸变镜检,其特点是使用低倍物镜,不用伯特兰透镜(Bertrand Lens),同时为使照明孔径变小,推开聚光镜的上透镜。

    正相镜检用于检查物体的双折射性。

    2、锥光镜检(Conoscope):又称干涉镜检,这种方法用于观察物体的单轴或双轴性。

    (四)偏光显微镜在装置上的要求

    1、光源:最好采用单色光,因为光的速度,折射率,和干涉现象由于波长的不同而有差异。一般镜检可使用普通光。

    辽宁福彩网2、目镜:要带有十字线的目镜。

    3、聚光镜:为了取得平行偏光,应使用能推出上透镜的摇出式聚光镜。

    辽宁福彩网4、伯特兰透镜:这是把物体所有造成的初级相放大为次级相的辅助透镜。

    辽宁福彩网(五)偏光镜检术的要求

    1、载物台的中心与光轴同轴。

    2、起偏镜和检偏镜应处于正交位置。

    3、制片不宜过薄。

    三、倒置显微镜(Inverted microscope)

    辽宁福彩网前面讲的是正立式显微镜的镜检方式,主要用于切片的观察。而倒置显微镜是为了适应生物学、医学等领域中的组织培养、细胞离体培养、浮游生物、环境保护、食品检验等显微观察。

    由于上述样品特点的限制,被检物体均放置在培养皿(或培养瓶)中,这样就要求倒置显微镜的物镜和聚光镜的工作距离很长,能直接对培养皿中的被检物体进行显微观察和研究。因此,物镜、聚光镜和光源的位置都颠倒过来,故称为"倒置显微镜"。

    由于工作距离的限制,倒置显微镜物镜的最大放大率为60X。一般研究用倒置显微镜都配置有4X、10X、20X、及40X 相差物镜,因为倒置显微镜多用于无色透明的活体观察。如果用户有特殊需要,也可以选配其它附件,用来完成微分干涉、荧光及简易偏光等观察。

    目前倒置显微镜广泛应用于patch-clamp ,transgene ICSI 等领域。

    四、体视显微镜(Stereo microscope)

    体视显微镜又称“实体显微镜”或“解剖镜”,是一种具有正象立体感地目视仪器,被广泛地应用于生物学、医学、农林、工业及海洋生物各部门。它具有如下地特点:

    1. 双目镜筒中的左右两光束不是平行,而是具有一定的夹角—体视角(一般为12度~15度),因此成象具有三维立体感;

    2. 象是直立的,便于操作和解剖,这是由于在目镜下方的棱镜把象倒转过来的缘故;

    3. 虽然放大率不如常规显微镜,但其工作距离很长。

    4. 焦深大,便于观察被检物体的全层。

    5. 视场直径大。

    目前体视镜的光学结构是:由一个共用的初级物镜,对物体成象后的两光束被两组中间物镜----变焦镜分开,并成一体视角再经各自的目镜成象,它的倍率变化是由改变中间镜组之间的距离而获得的,因此又称为“连续变倍体视显微镜”(Zoom-stereo microscope)。

    随着应用的要求,目前体视镜可选配丰富的选购附件,如荧光

    下一篇: 铬矿选矿试验方案

    辽宁福彩网相关的文章

      无相关信息

耐磨渣浆泵| 高扬程渣浆泵| 合金渣浆泵| 液下渣浆泵| 百度地图

烟台鑫海矿山机械有限公司 业务经营许可证编号:鲁ICP备05051618号      服务热线:15311826765

辽宁福彩网 北京福彩网 云南体彩网 九龙内幕 安徽快3 六合人家 北京福彩网 安徽快3 北京福彩网 辽宁福彩网